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    6個小細(xì)節(jié),輕松搞定細(xì)胞“劃痕實(shí)驗(yàn)”

    發(fā)布時間: 2021-09-28  點(diǎn)擊次數(shù): 2434次

    傷口愈合試驗(yàn),也通常稱為“劃痕試驗(yàn)",是一種廣泛建立的研究體外集體細(xì)胞遷移的技術(shù)。細(xì)胞劃痕(Wound Healing)是一種操作簡單,經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。其實(shí)驗(yàn)原理是,當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。


    條件好的實(shí)驗(yàn)室可使用活細(xì)胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實(shí)驗(yàn)中角質(zhì)形成細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移活動。結(jié)合包含的軟件分析算法,有可能延遲量化間隙表面關(guān)閉和關(guān)閉推移時間的速度,但是使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點(diǎn)是,可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

     

    通常,用于傷口愈合試驗(yàn)的細(xì)胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細(xì)胞系和原代細(xì)胞經(jīng)常被用作這方面的模型。較為常用的細(xì)胞類型是角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。

     

    那么制作劃痕實(shí)驗(yàn)需要注意些什么呢?

    1. 細(xì)胞的密度;劃痕實(shí)驗(yàn)一般是幾種細(xì)胞的結(jié)合,但是每種細(xì)胞的生長速度會不一樣,所以需要按照細(xì)胞的生長特性調(diào)整培養(yǎng)時間,細(xì)胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好,建議是100%的鋪滿。

    2. 用槍頭畫線時盡量垂直,以6孔板為例 ,一個孔可以畫6條線

    3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次,以去除劃下的細(xì)胞

    4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基,因?yàn)椋簞澓酆笥脽o血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,意在說明在監(jiān)測的 24 小時內(nèi),劃痕的縮小是細(xì)胞 遷移作用的結(jié)果,所以要將細(xì)胞增殖造成細(xì)胞遷移的影響降到最小低;但若細(xì)胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮,需要適量加入血清濃度不能高于2%。

    5. (5)放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)。我們按0,10,12,15時間點(diǎn)取樣,拍照(具體時間依實(shí)驗(yàn)需要而定)。

    6. (6)統(tǒng)計方法:使用Image J軟件打開圖片后,抓取自己畫的線條,計算細(xì)胞間距離的平均值。


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