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    生化轉(zhuǎn)染的另一種選擇,磷酸鈣介導的轉(zhuǎn)染

    發(fā)布時間: 2021-10-11  點擊次數(shù): 1586次

    磷酸鈣介導的轉(zhuǎn)染方法應用于將外源DNA轉(zhuǎn)入培養(yǎng)的細胞,已有45年以上的歷史。Graham和van der Eb在磷酸鈣存在下,將病毒DNA導入哺乳動物細胞的這一工作,為基因在多種哺乳動物細胞中進行瞬時表達奠定基礎。


    因此,即使脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染方法是我們首先選擇,依然有很多實驗員在使用磷酸鈣介導的轉(zhuǎn)染。


    他的主要原理是,磷酸鈣與DNA形成不可溶的沉淀物,即磷酸鈣-DNA復合物,吸附于細胞膜表面,通過細胞的內(nèi)吞作用或吞噬作用,進入細胞中。磷酸鈣起到促進DNA進入的細胞的作用。


    磷酸鈣介導的轉(zhuǎn)染方法的優(yōu)點:

    1、細胞毒性低

    2、可轉(zhuǎn)染大質(zhì)粒

    3、操作簡單

    4、成本非常低廉。


    但具有以下缺點:

    1、由于試劑的PH值對沉淀形成有巨大影響,對于不同核酸需要調(diào)整方案

    2、有時會表現(xiàn)出免疫原性

    3、對原代細胞無效

    4、不能在細胞培養(yǎng)基中制備轉(zhuǎn)染復合物。


    在使用上有很多需要注意的地方,這可能也是在生化方法中,脂質(zhì)的優(yōu)先級別更高的理由


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