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植物原生質體的制備
發(fā)布時間： 2023-01-29 點擊次數： 1242次原理
去掉植物細胞壁的方法可以是機械的人工操作，也可以利用酶解法。較早利用機械法制備原生質體的首-推Klercker（1892），直到1960 年英國科學家Cocking 才第一次用酶法大量制備原生質體。本實驗以植物的葉肉組織為材料，利用纖維素酶和果膠酶來消化細胞壁，分離細胞。材料與儀器
油菜或菠菜或煙草
氯化鈣 蒸餾水 2蔗糖 酶解液
顯微鏡 離心機 離心管 剪刀 鑷子 吸管 培養(yǎng)皿 載玻片 蓋玻片步驟
1、取材 根據實驗目的和條件選取不同的材料
2、分離原生質體
（1） 撕葉下表皮
（2）酶解 將撕去下表皮的葉片剪成小塊，放在盛有5mL 酶液的小培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液，輔滿一層，在25——28℃下酶解60——90 分鐘
3、收集純化
（1）用吸管將酶解液吸至5mL 離心管中，以600rpm 離心5 分鐘以上，使原生質體沉降
（2）將上清（酶解液）回收，剩下原生質體及殘渣于管底
（3）加氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻
（4）用注射器向離心管底部緩緩注入蔗糖約2—3mL，出現下部蔗糖液，上部原生質體懸浮液
（5）以600rpm 離心10 分鐘，在兩液相之間出現一條綠色帶，便是純凈的原生質體
4、觀察或培養(yǎng)
取少許原生質體于載片上，蓋片觀察其形態(tài)，或者將原生質體接種在培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，再生植株。
注意事項
要培養(yǎng)懸浮細胞系需較長時間。因此,應著重改善培養(yǎng)條件,主要包括選用合適 的培養(yǎng)基 包括培養(yǎng)基 種類 、添加物 、激素種類及水平等 及培養(yǎng)方式 根 據培養(yǎng)物狀態(tài)適時改換適宜培養(yǎng)基 選擇合適的外植體及誘導時期 。常見問題
原生質體是裸露的、具有生命活性的細胞,體內包裹著細胞核、細胞器、細胞質等, 因此原生質體具有再生細胞壁、進行連續(xù)分裂并生成完整植株的能力 , 即具有細胞全*性。原生質 體能 攝 人 如 DNA、質粒 、病毒 、細菌 、細胞器等外源物質 , 是植物細胞工程進行遺傳操作 、基因轉移的良好材料 。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
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