細胞培養(yǎng)需要無菌技術。

什么是無菌技術？它和普通的實驗操作有什么區(qū)別？

首先，無菌技術是通過制定一個嚴格的操作規(guī)范來約束每個人做實驗的行為規(guī)范，從而排除潛在的污染可能。其原則就是在外部環(huán)境的微生物和細胞之間建立起一道屏障。

這道屏障有兩層含義：

1.讓細胞從物理上和外部非無菌的物品隔絕，不讓它們直接接觸

2.設計實驗操作時，所有步驟不能讓細胞和外部非無菌環(huán)境建立直接聯(lián)系

說白了，就是從各個環(huán)節(jié)、細節(jié)上去盡力做到沒有過失。

實驗操作臺面

在生物安全柜內進行細胞培養(yǎng)操作，操作臺面的使用有以下注意事項：

1 用之前，無論上一個使用者是否有擦拭臺面，你都需要重新擦拭一次，并使用70%乙醇消毒臺面，再使用紫外照射消毒30分鐘以上；

2 操作臺面內只放和本次實驗操作有關系的實驗工具，放置時按照分類和使用習慣來合理放置，切勿堆放在一起，也不要太靠近外部邊緣。

3.實驗過程中，如果培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多孔板已打開蓋子，那么手部和任何其他物品都不應該越過敞口上方，否則將可能把微生物帶入器皿內；

4.所有的實驗操作，都應該在你的視野范圍內進行，也就是你在操作時，必須能看到實驗工具的整體，這是為了避免因盲區(qū)導致的實驗工具的末端觸碰到其他物品、臺面或你的身體部位，導致污染；

5.在實驗過程中，如果出現試劑、培養(yǎng)物液體滴在臺面，應停止當前操作，并立即用70%乙醇擦拭臺面；

6.實驗結束后，所有實驗物品都應搬離臺面，并再次擦拭清潔，最后用70%乙醇消毒；

個人衛(wèi)生

1 穿實驗服、佩戴口罩和外科滅菌手套，長頭發(fā)的同學應把頭發(fā)扎在腦后，佩戴的手套的上緣應該與實驗服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進手套內；

2 手套在整個實驗過程中，不管是否有移出生物安全柜以外的范圍，都應間隔一段時間就使用70%乙醇擦拭一次；

3 如果感染了疾病，例如感冒，則應該暫緩實驗或佩戴面罩后再進入細胞間做實驗；

4 實驗過程中，如果實驗操作者和培養(yǎng)物之間有玻璃間隔，可以說話，但應該盡量少說話。

試劑和培養(yǎng)基

1 從外部采購的試劑和培養(yǎng)基，如果有外包裝，包括紙盒、薄膜等，都應該在細胞間外去除后，再使用70%乙醇消毒外表面后才放入操作臺面；

2 如果實驗過程中，這些試劑、培養(yǎng)基曾拿出過生物安全柜以外的范圍，例如放入了冰箱、培養(yǎng)箱、水槽等，需要重新擦拭干凈后用70%乙醇消毒，然后才可以再次放入操作臺面內。

培養(yǎng)物

1. 在每一次實驗之前，先用肉眼觀察細胞是否正常沒有污染，并在顯微鏡下再次檢查確認，如果污染則應停止該次實驗并清理掉細胞；細胞拿進生物安全柜之前，同樣需要用70%乙醇擦拭培養(yǎng)器皿外表面；

2 每一批次的細胞，在培養(yǎng)周期內，都應該取一部分出來單獨使用無抗生素的（血清）細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)檢測，判斷其是否有潛在污染，這是為了排除抗生素對污染的干擾。

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